Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui Pengaruh Penggunaan Media Audio Visual Terhadap Hasil Belajar Biologi Materi Ekosistem Pada Peserta Didik Kelas X SMA Negeri 3 Panyabungan. Penelitian ini dilatarbelakangi oleh rendahnya hasil belajar peserta didik pada materi ekosistem serta perlunya penggunaan media pembelajaran yang dapat membantu menyajikan konsep secara lebih konkret dan menarik. Media audio visual dipilih karena memadukan unsur gambar dan suara yang dapat membantu peserta didik memahami materi dengan lebih mudah. Penelitian ini menggunakan pendekatan kuantitatif dengan metode Pre-Experimental Design melalui desain One-Group Pretest-Posttest Design. Sampel penelitian berjumlah 25 peserta didik kelas X E1 SMA Negeri 3 Panyabungan yang dipilih menggunakan teknik purposive sampling. Pengumpulan data dilakukan menggunakan tes hasil belajar berupa pretest dan posttest. Analisis data meliputi uji normalitas, Paired Sample t-test, N-Gain, dan effect size menggunakan Cohen's d dengan bantuan SPSS versi 25. Hasil penelitian menunjukkan bahwa rata-rata nilai pretest sebesar 62,76, sedangkan rata-rata nilai posttest meningkat menjadi 84,76, dengan peningkatan sebesar 22,00 poin. Hasil uji Paired Sample t-test menunjukkan nilai Sig. (2-tailed) sebesar 0,000 < 0,05, sehingga terdapat perbedaan yang signifikan antara hasil pretest dan posttest. Hasil perhitungan N-Gain sebesar 0,58 termasuk dalam kategori sedang. Sementara itu, hasil analisis effect size (Cohen's d) sebesar 2,55 menunjukkan kategori efek sangat besar. Dengan demikian, dapat disimpulkan bahwa penggunaan media audio visual berpengaruh signifikan dan memberikan efek yang sangat besar terhadap hasil belajar Biologi materi ekosistem pada peserta didik kelas X SMA Negeri 3 Panyabungan.